影響凝膠色譜圖的重要因素

影響凝膠色譜圖的重要因素
由實(shí)驗(yàn)得到的凝膠色譜圖，再結(jié)合標(biāo)定線進(jìn)行分子量分布的計(jì)算。因而必須保持標(biāo)定色譜柱和測(cè)定試樣對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的一致性，否則將會(huì)引起譜圖的位置、形狀、寬度的變化導(dǎo)致計(jì)算結(jié)果的誤差。另外實(shí)驗(yàn)條件本身選擇不合適也會(huì)影響色譜圖。
　　a ．流速
　　目前，凝膠色譜實(shí)驗(yàn)中，一般直接記錄譜圖的淋出體積（或保留時(shí)間）作為計(jì)算參數(shù)。流速的變化將直接影響譜圖的淋出體積，1％的流速變化會(huì)引起分子量的誤差達(dá)8％。因此，要求輸液泵流速穩(wěn)定在1％以內(nèi)。同樣，記錄儀紙速恒定也很重要，需恒定在0.2％以內(nèi)。
　　b ．進(jìn)樣濃度
　　凝膠色譜圖與進(jìn)樣濃度有關(guān)，隨著進(jìn)樣濃度的增加，色譜圖后移，變寬甚至出現(xiàn)多峰。當(dāng)分子量愈大，溶劑愈良好，流速愈大，分布愈寬時(shí)，色譜圖的濃度依賴性表現(xiàn)愈明顯。一旦譜圖有了濃度依賴性，其后果是：所計(jì)算的分子量偏小，分布變寬、分離效率變差。因此配制高分子溶液時(shí)，在檢測(cè)器靈敏度允許范圍內(nèi)應(yīng)盡可能低。當(dāng)采用示差檢測(cè)器時(shí)，濁度計(jì)| 色度計(jì)| 粘度計(jì)| 折射計(jì)| 滴定儀| 密度計(jì)| 熱流計(jì)| 濃度計(jì)| 折射儀| 采樣儀| 如高分子與溶劑的折光指數(shù)差很小，必須配制較高濃度才能得到足夠的信號(hào)，這時(shí)為了消除濃度對(duì)峰位的影響，可采用不同濃度進(jìn)樣，然后，以峰位對(duì)濃度作圖，求得外推濃度至零時(shí)的峰值。此法只適用于低分子量（M < 5×105），因?yàn)樵诟叻肿恿扛邼舛葧r(shí)，峰值對(duì)濃度作圖為非線性的。
　　在凝膠色譜實(shí)驗(yàn)中還有一個(gè)導(dǎo)致譜圖后移的是由大分子降解引起。當(dāng)大分子流經(jīng)色譜柱時(shí)由于剪切作用產(chǎn)生降解，它隨流速增加而增加，故是機(jī)械降解。影響降解的因素很多，當(dāng)分子量愈大、濃度愈高、溶劑性能愈差、色譜柱填料愈細(xì)、降解愈嚴(yán)重。為了消除色譜圖的濃度依賴性，有人曾采用θ溶劑，但從降解的角度來(lái)看是非常不利的。因此，對(duì)高分子量聚合物需綜合選擇實(shí)驗(yàn)條件，盡可能選低濃度、低流速以確保結(jié)果的可靠。